基础研究
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世界华人消化杂志. 2020-01-08; 28(1): 9-17
Published online 2020-01-08. doi: 10.11569/wcjd.v28.i1.9
miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究
汪根良, 华崇俊, 张向明, 范红娟
汪根良, 华崇俊, 张向明, 范红娟, 金华市中心医院金西院区婺城区第一人民医院内科 浙江省金华市 321075
汪根良, 副主任医师, 研究方向为消化内科与心血管疾病诊治.
作者贡献分布: 汪根良与华崇俊所作贡献均等; 此课题由汪根良, 华崇俊, 张向明及范红娟设计; 研究过程由汪根良, 华崇俊, 张向明及范红娟操作完成; 研究所用试剂及分析工具由张向明提供; 数据分析由汪根良, 华崇俊及张向明完成; 本论文写作由汪根良, 华崇俊, 张向明及范红娟完成.
通讯作者: 汪根良, 副主任医师, 321075, 浙江省金华市汤溪镇琳湖路, 金华市中心医院金西院区婺城区第一人民医院内科. 13982384@qq.com
收稿日期: 2019-11-29
修回日期: 2019-12-20
接受日期: 2019-12-29
在线出版日期: 2020-01-08
文章亮点
实验背景

胃癌(gastric cancer, GC)发病率逐年升高, 但GC发生及发展的分子机制尚未阐明, 已有研究报道显示miRNA异常表达可调控GC细胞增殖、迁移及侵袭, 但仍有部分miRNA在GC发生过程中的作用机制尚未可知.

实验动机

miR-132-3p在GC中的表达下调, 但miR-132-3p在GC发生发展过程中的作用机制尚未阐明. 既往研究显示miR-132-3p在肿瘤发生过程可能发挥抑癌作用. 因而探究miR-132-3p在GC发生及发展中的作用机制对GC诊断及治疗均具有重要意义.

实验目标

miR-132-3p过表达可通过抑制Gab2表达从而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭, 为GC靶向治疗提供潜在靶点.

实验方法

qRT-PCR与Western blot检测GC细胞中miR-132-3p与Gab2的表达, 选用低表达量的BGC-823细胞为研究对象, 分别将miR-132-3p mimics转染至细胞中, MTT法检测细胞增殖能力; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力; 双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p与Gab2的靶向调控作用; pcDNA-Gab2与miR-132-3p mimics共转染至BGC-823细胞, 采用MTT法、Transwell小室检测细胞增殖、迁移及侵袭能力; Western blot法检测各组细胞中增殖、迁移及侵袭相关蛋白表达.

实验结果

miR-132-3p在GC细胞系中表达水平降低, Gab2的表达水平升高, miR-132-3p过表达可抑制BGC-823细胞增殖、迁移及侵袭, 抑制CyclinD1、N-cadherin蛋白表达, 促进P21、E-cadherin蛋白表达. 双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向结合Gab2, 并可负向调控Gab2的表达. Gab2过表达可逆转miR-132-3p过表达对BGC-823细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.

实验结论

miR-132-3p的表达水平显著降低, 上调miR-132-3p表达可靶向干扰Gab2表达从而减弱GC细胞增殖、迁移及侵袭能力.

展望前景

miR-132-3p上游调控基因LncRNA尚未可知, miR-132-3p通过调控Gab2基因表达而发挥作用, 但其是否可通过调控相关信号通路从而发挥作用尚未可知, 还需进行体内移植瘤实验验证miR-132-3p的抗癌作用, miR-132-3p可能作为GC治疗的靶标基因.