miR-132-3p靶向调控Gab2抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭分子机制的研究

Abstract

背景

miR-132-3p在肿瘤中呈低表达, 但miR-132-3p在胃癌(gastric cancer, GC)发生过程中的调控机制尚未阐明. Starbase靶基因预测显示Gab2可能是miR-132-3p的靶基因. 本研究假设miR-132-3p可能通过调控Gab2表达从而影响GC细胞增殖、迁移及侵袭.

目的

探讨miR-132-3p对Gab2表达的调控作用及其对GC细胞增殖、迁移及侵袭的影响.

方法

采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测正常胃黏膜上皮细胞系GES1与人GC细胞系SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p、Gab2的表达水平; 以BGC-823细胞为研究对象, 利用脂质体转染法分别将miR-132-3p模拟物(miR-132-3p组)、阴性对照(miR-NC组)、miR-132-3p与pcDNA (miR-132-3p+pcDNA组)、miR-132-3p与pcDNA-Gab2(miR-132-3p+pcDNA-Gab2组)转染至BGC-823细胞, 通过qRT-PCR、Western blot验证转染效果. 甲基噻唑基四唑检测各组细胞存活率; Transwell小室实验检测各组细胞迁移及侵袭; Starbase预测Gab2为miR-132-3p的靶基因, 分别将野生型Gab2基因3'UTR荧光素酶报告基因载体与miR-132-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至BGC-823细胞, 双荧光素酶报告实验检测荧光素酶活性; Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、P21、上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达量.

结果

与GES1细胞相比, SGC-7901、MKN45、BGC-823中miR-132-3p的表达水平显著降低(P<0.05), Gab2的表达水平显著升高(P<0.05); 与miR-NC组相比, miR-132-3p组细胞存活率显著降低(P<0.05), 迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05), CyclinD1、N-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05); 双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因; 与miR-132-3p+pcDNA组相比, miR-132-3p+pcDNA-Gab2组细胞存活率显著升高(P<0.05), 迁移细胞数与侵袭细胞数显著增多(P<0.05), CyclinD1、N-cadherin蛋白表达水平显著升高(P<0.05), P21、E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.05).

结论

miR-132-3p能够通过靶向调控Gab2而抑制GC细胞增殖、迁移及侵袭.

Keywords: miR-132-3p; Gab2; 胃癌; 增殖; 迁移; 侵袭

核心提要: miR-132-3p在胃癌中表达下调, Gab2表达上调, 双荧光素酶报告实验证实miR-132-3p能够靶向调控Gab2基因, miR-132-3p过表达可通过干扰Gab2表达从而抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭.