基础研究
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世界华人消化杂志. 2018-03-18; 26(8): 479-487
Published online 2018-03-18. doi: 10.11569/wcjd.v26.i8.479
白藜芦醇对HSC-T6细胞NLRP3炎性体活化的影响
朱毅, 阙任烨, 李勇
朱毅, 上海市嘉定区中医医院内一科 上海市 201800
阙任烨, 上海中医药大学附属上海市中西医结合医院脾胃病科 上海市 200082
李勇, 上海中医药大学附属上海市中医医院脾胃病科 上海市 200071
朱毅, 主治医师, 主要从事消化系统的临床与基础研究.
基金项目: 国家自然科学基金, No. 81573775; 上海市卫生系统百人计划基金, No. XBR2013120.
作者贡献分布: 朱毅负责论文写作、实验研究及数据分析; 阙任烨负责论文修改、实验研究及数据分析; 李勇负责论文审核.
通讯作者: 李勇, 主任医师, 博士生导师, 200071, 上海市闸北区芷江中路274号, 上海中医药大学附属上海市中医医院脾胃病科. liyong8256@126.com
电话: 021-65415910
收稿日期: 2018-01-14
修回日期: 2018-02-05
接受日期: 2018-02-10
在线出版日期: 2018-03-18
Abstract
目的

研究白藜芦醇(resveratrol, Res)对肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)-T6细胞内Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3, NLRP3)炎性体活化的影响, 探讨Res抗肝纤维化的作用机制, 为Res的临床应用提供理论依据.

方法

体外培养大鼠HSC系HSC-T6, 细胞用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养种板, 细胞贴壁后加入Res(4、8、16 μmol/L)或乙酰半胱氨酸(5 mmol/L)孵育24 h. 随后加入过氧化氢(0.2 mmol/L)孵育4 h制作氧化应激模型. 采用MTT法检测细胞增殖水平. ELISA法检测细胞培养上清液中的I型胶原(collagen type 1, COL-1)、转化生长因子(transforming growth factor β1, TGF-β1)、白介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、IL-18、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的含量. 荧光酶标仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量. Western blot法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin, α-SMA)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein, ASC)、caspase1的表达.

结果

与对照组比较, Res在浓度范围4-64 μmol/L对HSC-T6细胞均有显著的抑制效应(P<0.01). 与对照组比较, 氧化应激模型组细胞增殖率, 细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量, 细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、caspase1-p10蛋白表达均呈显著增高趋势(P<0.01); 细胞上清液中SOD含量呈明显下降趋势(P<0.01). 与模型组比较, Res低、中、高剂量及阳性对照药NAC均可显著抑制HSC-T6细胞增殖率, 减少细胞上清液中COL-1、TGF-β1、MDA、IL-1β、IL-18含量, 细胞内ROS产量及α-SMA、NLRP3、ASC、caspase1-p10蛋白表达(P<0.01); 显著提高细胞上清液中SOD的含量(P<0.01).

结论

Res能够通过调节ROS-NLRP3炎性体通路抑制HSC-T6细胞的增殖与活化.

Keywords: 白藜芦醇; 肝纤维化; 肝星状细胞; NLRP3炎性体

核心提要: 本文在既往研究证实白藜芦醇(resveratrol, Res)抗氧化应激作用的基础上, 通过观察Res对活性氧(reactive oxygen species, ROS)下游Nod样受体蛋白3(nod-like receptor protein 3, NLRP3)炎性体激活的影响, 在细胞水平初步发现其抑制肝星状细胞的作用的机制与抑制ROS活化的NLRP3炎性体相关.