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世界华人消化杂志. 2005-10-15; 13(19): 2306-2309
Published online 2005-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i19.2306
Published online 2005-10-15. doi: 10.11569/wcjd.v13.i19.2306
人F3-GRIM19基因的克隆与表达
孙厚良, 刘洋, 李甲初, 曾昭淳, 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室 重庆市 400016
孙厚良, 男, 1975-08-10生, 重庆市人, 汉族, 重庆医科大学生物化学与分子生物学硕士研究生, 主要从事肿瘤分子生物学方面的研究.
基金项目: 重庆市教委资助项目 , No. 1 .
通讯作者: 曾昭淳, 400016, 重庆医科大学生化与分子生物学教研室. zengzc88@yahoo.com.cn
电话: 023-68485398
收稿日期: 2005-06-28
修回日期: 2005-07-03
接受日期: 2005-07-06
在线出版日期: 2005-10-15
修回日期: 2005-07-03
接受日期: 2005-07-06
在线出版日期: 2005-10-15
Abstract
目的: 克隆GRIM19基因, 并构建F3-GRIM19表达载体.
方法: 从正常人胎盘组织中克隆GRIM19的cDNA, 并构建了F3-GRIM19表达载体, 测序正确后, 表达并亲和层析纯化F3-GRIM19融合蛋白.
结果: 克隆后测序, 发现其含有约580 bp的插入片段, 基因与GenBank序列完全一致, 读码框正确. 在大肠杆菌中表达Mr 25 000的F3-GRIM19蛋白, 灰度值分析表达量约占菌体总蛋白的25%. 经纯化, 目的蛋白纯度达90%, 复性率为17.3%.
结论: 成功构建了F3-GRIM19原核表达载体, 并成功表达纯化了目的蛋白.
Keywords: GRIM19基因; 克隆; 表达; 纯化