p53和β-catenin在胆囊癌组织中的表达及意义

摘要

目的: 探讨p53和β-catenin在胆囊癌组织中的表达及其意义.

方法: 应用免疫组织化学检测p53和β-catenin在58例胆囊癌、10例胆囊腺瘤性息肉及20例慢性胆囊炎中的表达, 并对结果进行统计学分析.

结果: (1)胆囊癌组p53和β-catenin的表达阳性率(62.07%, 68.97%)明显高于胆囊腺瘤性息肉组(33.33%, 40.00%)及慢性胆囊炎组(10.00%, 5.00%)(P<0.05); (2)p53和β-catenin在胆囊癌中的表达无明显相关性(P>0.05); (3)胆囊癌高分化、NevinⅠ-Ⅲ期、未侵犯周围组织器官病例阳性率明显低于中低分化、Nevin Ⅳ-Ⅴ期、有侵犯周围组织器官病例(P<0.05).

结论: p53和β-catenin在胆囊癌的发生发展以及临床生物学特征有密切关系.

关键词: 胆囊癌; p53; β连环蛋白; 免疫组织化学

核心提示: 通过p53与β-catenin在胆囊癌中表达之间的相关性进行分析, 发现两者无明显关联性, 可以推论p53和β-catenin在胆囊癌发生发展过程中的机制、途径可能不同. 胆囊癌中低分化、Nevin Ⅳ-Ⅴ期、有侵犯周围组织病例中p53和β-catenin的表达明显高于高分化、Nevin Ⅰ-Ⅲ期、未侵犯周围组织的病例, 对胆囊癌的预后可以提供积极的指导作用.

Clinical significance of expression of p53 and β-catenin in gallbladder carcinoma

Xiao-Bo Xia, Ren-Feng Li, Long-Shuan Zhao

Xiao-Bo Xia, Ren-Feng Li, Long-Shuan Zhao, the Second Department of Hepatobiliary Surgery, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450052, Henan Province, China

Correspondence to: Long-Shuan Zhao, Professor, the Second Department of Hepatobiliary Surgery, the First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, 1 Jianshe East Road, Zhengzhou 450052, Henan Province, China. zhaoruix@126.com

Received: September 15, 2014
Revised: November 2, 2014
Accepted: November 4, 2014
Published online: December 18, 2014

Abstract

AIM: To examine the expression of p53 and β-catenin in gallbladder carcinoma and to analyze their significance.

METHODS: The expression of p53 and β-catenin in 58 gallbladder carcinoma specimens, 10 adenomatous polyp specimens and 20 chronic cholecystitis specimens was detected by immunohistochemistry.

RESULTS: The positive expression rates of p53 and β-catenin in gallbladder carcinoma (62.07%, 68.97%) were significantly higher than those in adenomatous polyps (33.33%, 40.00%) and chronic cholecystitis (10.00%, 5.00%) (P < 0.05). There was no significant correlation between the expression of p53 and that of β-catenin in gallbladder carcinoma (P > 0.05). The positive expression rates of p53 and β-catenin were lower in well differentiated than in moderately and lowly differentiated gallbladder carcinoma tissues, but lower in early stage (Nevin Ⅰ-Ⅲ) than in advanced stage (Nevin Ⅳ-Ⅴ) and in cases without lymph node metastasis or invasion of the surrounding tissues than in those with (P < 0.05).

CONCLUSION: The overexpression of p53 and β-catenin may be closely related to the initiation and biological behavior of gallbladder carcinoma.

Key Words: Gallbladder cancer; p53; β-catenin; Immunohistochemistry

0 引言

胆囊癌是胆道系统中较常见的恶性肿瘤, 其恶性程度高, 大部分患者在确诊后1年内死亡. 胆囊癌的发生发展具体机制尚不明确, 是一个多基因参与调节的过程[1]. 近年来分子生物学技术的发展和不断完善, 使我们能从分子水平开始认识肿瘤的发生发展过程, 同时, 与胆囊癌发生有关的癌基因、抑癌基因不断被发现. p53是一种抑癌基因, 分为野生型和突变型两种亚型, 突变型p53可使其失去对细胞生长、凋亡、调控的控制而具有癌基因活性. 连环蛋白(catenin)是几年来发现的一组细胞内糖蛋白, 根据目前研究资料已证明其参与有连环蛋白介导的信号转导和细胞间黏附作用[2]. β-catenin是4种连环蛋白的一种, 在细胞内, 他与连环蛋白胞内胎段结合形成复合体(cadherin-catenin complex, CCC)[3], 当β-catenin的酪氨酸残基磷酸化后将影响CCC的稳定性, 从而影响Wnt/β-catenin信号途径, 使黏附作用降低, 导致细胞分散增加, 移动加强和侵袭[4]. 现多项研究[5]表明, β-catenin能促进多种原癌基因表达, 同时他又被认为是多种原癌基因的产物. 本研究讨论p53和β-catenin在胆囊癌组织中的表达是否有相关性以及与胆囊癌临床病理因素之间的关系.

1 材料和方法

1.1 材料

58例胆囊癌、10例胆囊腺瘤性息肉、20例慢性胆囊炎组织均选自郑州大学第一附属医院2010-06/2014-06手术切除. 其中胆囊癌组男性17例, 女性41例, 年龄31-82岁, 平均46.8岁±6.6岁, 组织病理学均为腺癌, 分化程度: 高分化10例, 中分化30例, 低分化18例. 根据Nevin分期标准, Ⅰ-Ⅲ期(Ⅰ期2例、Ⅱ期8例、Ⅲ期12例)共22例, Ⅳ-Ⅴ期(Ⅳ期30例, Ⅴ期6例)共36例. 胆囊腺瘤性息肉组10例, 男性3例, 女性7例, 年龄范围31-71岁, 平均45.3岁±5.7岁. 慢性胆囊炎组20例, 男性8例, 女性12例, 年龄范围38-66岁, 平均41.2岁±8.3岁. 上述所有病例均为首次发现, 术前未经放化疗, 且均有完整的临床、病理资料. 所有标本经40 g/L甲醛固定, 石蜡包埋制成切片, 病理诊断明确. 兔抗人p53及兔抗人β-catenin、SP9000试剂盒以及DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物工程公司.

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学SP法: 切片脱蜡, 柠檬酸抗原修复10 min, PBS浸泡5 min, 质量分数为5%的H2O2封闭内源性过氧化物酶, 滴加山羊血清50 μL/片30 min, 滴加一抗过夜, 滴加二抗30 min, 滴加辣根酶标记卵霉链白素50 μL/片, DAB显色, 苏木素复染, 二甲苯透明, 中性树胶封片, 加盖玻片, 镜下观察.

1.2.2 结果判定: 光镜下p53以细胞核含棕黄色颗粒为阳性反应, β-catenin在癌组织中以胞质中见到棕黄色染色颗粒为阳性. 每张玻片随机选5个高倍视野, 每个高倍视野计数150个细胞并且计算其阳性率. 阳性细胞率均值≥15%为阳性表达, <15%为阴性表达.

统计学处理 采用SPSS19.0统计软件进行分析, 应用χ²检验, P<0.05为差异有统计学意义.

2 结果

2.1 胆囊良恶性组织中p53和β-catenin的表达情况

p53阳性产物主要定位在细胞核, 胞核呈现褐色或棕黄色为阳性; β-catenin以胞质中呈棕黄色染色颗粒为阳性(图1). 胆囊癌组p53和β-catenin的表达阳性率(62.07%, 68.97%)明显高于胆囊腺瘤性息肉组(33.33%, 40.00%)及慢性胆囊炎组(10.00%. 5.00%), 其差异有统计学意义(P<0.05)(表1).

表1 p53和β-catenin在胆囊良恶性组织中的表达 n(%).

类型	n	p53			β-catenin
		表达阳性	χ2值	P值	表达阳性	χ2值	P值
胆囊癌	58	36(62.07)			40(68.97)
腺瘤性息肉	10	3(33.33)			4(40.00)
慢性胆囊炎	20	2(10.00)			1(5.00)
			17.45	<0.05		24.91	<0.05

图1 胆囊良恶性组织中p53和β-catenin的表达情况(SP×400). A: p53在胆囊癌中的阳性表达; B: p53在胆囊癌中的阴性表达; C: β-catenin在胆囊癌中的阳性表达; D: β-catenin在胆囊癌中的阴性表达.

2.2 p53和β-catenin在胆囊中表达的相关性

胆囊癌中p53和β-catenin的表达不具有相关性(χ² = 0.23, P>0.05)(表2).

表2 p53和β-catenin在胆囊癌中的表达的配对分析.

β-catenin	p53		合计
	阳性	阴性
阳性	24	16	40
阴性	12	6	18
合计	36	22	58

2.3 p53和β-catenin的表达与胆囊癌临床病理特征的关系

胆囊癌高分化、Nevin Ⅰ-Ⅲ期、未侵犯周围组织病例明显低于中低分化、Nevin Ⅳ-Ⅴ期、有侵犯周围组织病例, 差异均有统计学意义(P<0.05). p53和β-catenin的表达与胆囊癌患者的年龄及性别无明显关系(P>0.05)(表3).

表3 p53和β-catenin的表达与胆囊癌临床病理特征.

临床病理特征	n	p53阳性率(%)	χ2值	P值	β-catenin阳性率(%)	χ2值	P值
性别			0.11	>0.05		0.07	>0.05
男	17	58.82			64.71
女	41	63.41			60.98
年龄(岁)			0.65	>0.05		1.88	>0.05
≤45	20	55.00			50.00
>45	38	65.79			73.68
分化程度			6.28	<0.05		13.01	<0.05
高分化	10	33.33			20.00
中分化	30	63.33			60.00
低分化	18	77.78			88.89
Nevin分期			4.16	<0.05		6.74	<0.05
Ⅰ-Ⅲ期	22	45.45			40.91
Ⅳ-Ⅴ期	36	72.22			75.00
侵犯周围组织			5.55	<0.05		5.78	<0.05
有	30	73.33			80.00
无	28	42.86			50.00

3 讨论

胆囊癌早期缺乏临床症状, 而当出现症状时却又和慢性胆囊炎及胆绞痛表现相似, 此时行彩超、计算机断层扫描(computed tomography, CT)、核磁共振成像(nuclear magnetic resonance imaging, MRI)等影像学检查往往发现已经浸润肝脏或周围组织器官, 亦或发生远处转移. 目前来说, 最好的选择是手术切除, 但多数患者确诊时己处于中、晚期, 仅有7%-25%的患者有条件实施根治性手术. 近年来的研究表明胆囊癌的发生发展是一个多基因调控的过程, 抑癌基因的失活及原癌基因的激活是肿瘤发生发展的重要途径[6].

p53是一种抑癌基因, 该基因编码一种分子量为53 kDa的蛋白质, 故命名为p53, 其控制着细胞周期的启动[7]. p53有两种亚型, 一是野生型, 二是突变型. 由于野生型蛋白的半衰期较短, 因此免疫组织化学不能检测出野生型p53的表达[8]. 突变型p53对肿瘤的形成起重要作用, 由于其空间构象发生改变, 失去了对细胞生长、凋亡和DNA修复的调控作用, p53基因由抑癌基因转变为癌基因[9], 而这种基因转变在人类一些癌症如胃癌、结肠癌、子宫内膜癌的发生中比较常见[10].

β-catenin为一条多肽链, 其分子量为90-95 kDa, 含有约785个氨基酸. 主要分三个结构域: 一是氨基端可使β-catenin翻译后保持其稳定性, 二是羧基端负责激活靶基因的转录, 第三个结构域称arm域, 由于其结构紧密, 故可以防止蛋白水解, 是β-catenin与其配体结合并发挥相关作用的基础[11]. β-catenin主要有两个功能, 他不仅是重要的细胞黏附分子和细胞骨架成分, 还是Wnt信号通路中的一个重要组成部分[12]. 若β-catenin异常表达, 从而影响Wnt/β-catenin信号途径, 促进癌变的发生[13].

本次试验中, 胆囊癌组中p53和β-catenin的表达均明显高于腺瘤性息肉组和慢性胆囊炎组, 其差异有统计学意义(P<0.05), 与智迎辉等[14]和Kohya等[15]的研究结果一致, 提示突变的p53和β-catenin可能与胆囊癌的发生有密切关系. 而对其在胆囊癌中表达之间的相关性进行分析, 发现两者无明显关联性, 可以推论p53和β-catenin在胆囊癌发生发展过程中的机制、途径可能不同. 胆囊癌中低分化、Nevin Ⅳ-Ⅴ期、有侵犯周围组织病例中p53和β-catenin的表达明显高于高分化、Nevin Ⅰ-Ⅲ期、未侵犯周围组织的病例, 对胆囊癌的预后可以提供积极的指导作用.

目前, 对胆囊癌的研究已经深入到分子水平, 相信随着对p53、β-catenin以及相关作用因子更加深入的研究, 胆囊癌诊断晚, 预后差的问题将得到明显改善, 同时也为胆囊癌的基因治疗提供新思路.

评论

背景资料

胆囊癌是胆道系统中较常见的恶性肿瘤, 其临床症状隐匿, 发现晚, 恶性程度高, 大部分患者在确诊后1年内死亡. 现多项研究表明胆囊癌的发生发展是一个多基因的调控过程, 与抑癌基因的失活以及原癌基因的激活密切关系. p53和β-catenin这两种基因在胆囊癌发生发展以及预后中扮演重要的角色.

同行评议者

江建新, 副主任医师, 贵阳医学院附属医院肝胆外科

研发前沿

p53是一种抑癌基因, 有2种亚型, 其中突变型p53使其失去对细胞生长、凋亡、调控的控制而具有癌基因活性. β连环蛋白(β-catenin)可影响Wnt/β-catenin信号途径, 使黏附作用降低, 导致细胞分散增加, 移动加强和侵袭. 国内外将两种基因结合起来研究甚少, 本实验主要探讨两者之间是否有关联性.

相关报道

目前已经证实p53以及β-catenin在胆囊癌发生发展以及预后发面发挥重要作用, 但其机制却需要进一步研究.

创新盘点

国内外研究者多把p53与β-catenin单独与胆囊癌结合起来对其表达情况进行研究, 而将这两种基因结合起来研究者甚少.

应用要点

本研究提示: 不同病理因素特点的胆囊癌患者在p53和β-catenin的表达情况, 对于预后判断具有积极的指导作用. 随着对胆囊癌相关作用因子的深入研究, 胆囊癌诊断晚, 预后差的问题将得到明显改善, 同时也为胆囊癌的基因治疗提供新思路.

名词解释

Wnt信号通路: 是细胞增殖分化的关键调控环节, 在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用. Wnt途径参与了基因表达调节、细胞迁移黏附、细胞极化等过程. 如果这条信号通路中的关键蛋白发生突变, 导致信号异常活化, 就可能诱导癌症的发生.

同行评价

本文内容国内外目前研究较多, 但未见将两者结合研究的报道, 具有一定的临床参考价值.

参考文献

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备注

编辑: 郭鹏 电编:都珍珍