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世界华人消化杂志. 2006-11-18; 14(32): 3151-3154
在线出版日期: 2006-11-18. doi: 10.11569/wcjd.v14.i32.3151
肝硬化患者肝组织中PCNA和Ki-67的表达
权春姬, 金仁顺, 朴东明
权春姬, 金仁顺, 朴东明, 延边大学附属医院病理科 吉林省延吉市 133000
通讯作者: 朴东明, 133000, 吉林省延吉市局子街1327号, 延边大学附属医院病理科. pdm1117@hotmail.com
电话: 0433-2660121 传真: 0433-2513610
收稿日期: 2006-08-30
修回日期: 2006-09-13
接受日期: 2006-09-20
在线出版日期: 2006-11-18

目的: 探讨乙型肝炎和丙型肝炎肝硬化患者肝组织中PCNA和Ki-67抗原的表达及意义.

方法: 选择58例(乙肝肝硬化24例、丙肝肝硬化22例、慢性肝炎12例)肝脏标本, 做H-E染色观察肝组织的病理改变; 利用天狼红染色切片检测肝组织内胶原纤维的面密度; 采用免疫组织化学SP法观察肝组织中PCNA和Ki-67抗原的表达, 并检测阳性细胞的标记指数(labeling index, LI).

结果: 肝硬化胶原纤维的面密度百分比与慢性肝炎比较(12.2%±3.1% vs 1.40%±1.0%, P<0.001)明显增高, 乙型与丙型肝炎肝硬化胶原纤维的面密度百分比无明显差异(P>0.05); 慢性肝炎与肝硬化比较PCNA和Ki-67 LI (34.67%±8.6% vs 10.38%±3.76%, 2.81%±0.51% vs 1.69%±1.03%, 均P<0.001)明显增高; 丙肝肝硬化与乙肝肝硬化比较PCNA和Ki-67 LI(13.12%±1.42% vs 6.32%±2.18%, 2.48%±0.54% vs 0.95% ± 0.77%, 均P<0.001)均明显增高; 肝硬化胶原纤维的面密度与PCNA和Ki-6 LI之间无相关性(P>0.05).

结论: 肝硬化组织中肝细胞增殖指数比慢性肝炎低, 但丙型肝炎肝硬化的肝细胞增殖指数比乙型肝炎肝硬化高; PCNA和Ki-67 LI与肝硬化胶原纤维面密度无相关性.

关键词: 肝硬化; 慢性肝炎; 增殖细胞核抗原; Ki-67抗原
引文著录: 权春姬, 金仁顺, 朴东明. 肝硬化患者肝组织中PCNA和Ki-67的表达. 世界华人消化杂志 2006; 14(32): 3151-3154
Expression of proliferating cell nuclear antigen and Ki-67 antigen in liver tissues of cirrhotic patients
Chun-Ji Quan, Ren-Shun Jin, Dong-Ming Piao
Chun-Ji Quan, Ren-Shun Jin, Dong-Ming Piao, Department of Pathology, the Affiliated Hospital of Yanbian University, Yanji 133000, Jilin Province, China
Correspondence to: Dong-Ming Piao, Department of Pathology, the Affiliated Hospital of Yanbian University, 1327 Juzi Street, Yanji 133000, Jilin Province, China. pdm1117@hotmail.com
Received: August 30, 2006
Revised: September 13, 2006
Accepted: September 20, 2006
Published online: November 18, 2006

AIM: To investigate the expression and significances of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Ki-67 antigen in liver tissues of cirrhotic patients.

METHODS: SP immunohistochemical technique was performed to detect the expression of PCNA and Ki-67 in 58 liver specimens from patients with cirrhosis from hepatitis B (n = 24) and hepatitis C (n = 22), and chronic hepatitis (n = 12), and the labeling index (LI) of the positive cells was also determined. Sirius red staining was used to determine the area density of collagen in liver tissues.

RESULTS: The expression of PCNA and Ki-67 LI was significantly higher in chronic hepatitis than that in cirrhosis (34.67% ± 8.6% vs 10.38% ± 3.76%, P < 0.001; 2.81% ± 0.51% vs 1.69% ± 1.03%, P < 0.001), and moreover, they were markedly higher in hepatitis C-induced cirrhosis than those in hepatitis B-induced one (13.12% ± 1.42% vs 6.32% ± 2.18%, P < 0.001; 2.48% ± 0.54% vs 0.95% ± 0.77%, P < 0.001). The area density of collagenous fiber was significantly increased in cirrhosis than that in chronic hepatitis (12.0 ± 3.1 vs 1.40 ± 1.0, P < 0.001), but there was no difference between the two types of cirrhosis (P > 0.05). The area density of collagenous fiber had no significant correlation with the LI values of PCNA and Ki-6 in cirrhosis (P > 0.05).

CONCLUSION: The proliferation rate of liver cells is lower in cirrhosis than that in chronic hepatitis, but it is higher in cirrhosis from hepatitis C than that in the one from hepatitis B. There is no significant correlation between the area density of collagenous fiber and the expression of PCNA and Ki-67.

Key Words: Liver cirrhosis; Chronic hepatitis; Proliferating cell nuclear antigen; Ki-67
0 引言

增殖细胞核(PCNA)和Ki-67抗原在肝癌和肝硬化有较多的研究报道, 但在不同类型肝硬化中的研究较少. 本实验采用免疫组织化学方法观察46例肝硬化和12例慢性肝炎患者肝组织中PCNA和Ki-67抗原的表达, 并检测两种抗原的标记指数(labeling index, LI), 探讨两种抗原在乙型和丙型肝炎肝硬化中的表达及意义.

1 材料和方法
1.1 材料

选择我科存档的手术切除肝病标本共58例, 其中男22例, 女36例, 平均发病年龄40岁, 平均病史10.5年, 全部病例经血清肝炎病毒学检查证实, 其中乙肝肝硬化24例、丙肝肝硬化22例、慢性肝炎12例(乙肝、丙肝各6例), 复习全部病例的病历档案. 鼠抗人PCNA mAb、兔抗人Ki-67 mAb及SP试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司提供.

1.2 方法

全部标本均经40 g/L中性甲醛固定, 常规石蜡包埋, 4-5 μm厚的连续切片, 行HE染色观察肝组织的病理改变.

1.2.1 天狼猩红染色: 切片常规脱蜡至水, 天狼猩红-苦味酸饱和溶液(5 g/L天狼猩红溶液 10 mL, 苦味酸饱和溶液90 mL)染30 min, 无水乙醇分化脱水, 中性树胶封片. 胶原纤维的面密度: 采用彩色病理图象分析系统(北京航空航天大学CMIAS), 利用天狼猩红染色的切片检测胶原纤维的面密度, 用10倍物镜, 每张切片随机选择5个视野, 采集图象、分割处理、统计参数, 计算胶原纤维面密度百分比.

1.2.2 免疫组织化学染色: 采用SP法进行PCNA和Ki-67的染色, DAB显色, 以乳腺癌组织作PCNA, Ki-67的阳性对照; 以PBS代替一抗作阴性对照. PCNA与Ki-67抗原阳性细胞LI: 每例选择染色均匀的视野, 在40倍物镜下计数500个细胞中的阳性细胞, 取平均值.

统计学处理 计量数据均用mean±SD表示, 两样本均数的比较用t检验法.

2 结果

乙型肝炎肝硬化以水样变性多见, 仅少数病例(20%)出现轻度脂肪变, 丙型肝炎肝硬化大多数(75%)出现以大泡为主的脂肪变性.

2.1 胶原纤维的面密度

肝硬化胶原纤维的面密度百分比明显高于慢性肝炎(P<0.001), 乙型与丙型肝炎肝硬化肝组织胶原纤维的面密度百分比无明显差异(表1).

表1 肝硬化组织中PCNA, Ki-67 LI与胶原纤维面密度检测结果(mean±SD).
分组nPCNA LIKi-67 LI胶原纤维面密度(%)
慢性肝炎1234.67±8.6b2.81±0.51b1.40±1.0
肝硬化4610.38±3.761.69±1.0312.0±3.1f
乙型肝硬化246.32±2.180.95±0.7711.8±2.4
丙型肝硬化2213.12±1.42d2.48±0.54d12.2±3.8
bP<0.001 vs 肝硬化,
dP<0.001 vs 乙型肝硬化,
fP<0.001 vs 慢性肝炎.
2.2 免疫组化染色结果

慢性肝炎PCNA阳性细胞多位于坏死灶周围, 肝硬化在假小叶周边单个散在分布. 乙型肝炎肝硬化可见少量Ki-67阳性细胞单个散在分布, 丙型肝炎肝硬化阳性细胞多位于脂肪变性的肝细胞周围(图1). 慢性肝炎PCNA与Ki-67 LI均高于肝硬化, 丙型肝炎肝硬化PCNA与Ki-67 LI均高于乙型肝炎肝硬化(表1).

图1
图1 免疫组化染色结果(SP×100). A: 慢性肝炎PCNA的表达; B: 肝硬化PCNA的表达; C: 乙肝肝硬化Ki67的表达; D: 丙肝肝硬化Ki67的表达.
3 讨论

PCNA和Ki-67抗原是近年来发展的显示细胞增殖状态的比较成熟的标记物, 目前两种抗原多用于各种恶性肿瘤的研究中[1-4]. PCNA的高表达提示细胞内进行旺盛的DNA合成反应, 是S期细胞的良好标记物. Ki-67作为增殖细胞核抗原, 除G0期外各细胞周期都表达, 其中G2和M期表达最强. Donato et al[5-6]利用PCNA研究了慢性肝炎和肝硬化病人的肝脏标本, 发现PCNA能反应慢性病毒性肝炎病人的肝细胞增殖率, 与肝病的严重性相关, 并提出PCNA是肝细胞癌发生的最强独立危险因素. PCNA在肝癌和癌旁肝硬化的研究也有较多报道, 大多数研究结果表明, PCNA在肝癌和癌旁肝硬化表达高于单纯肝硬化, 但国内外的研究表明单纯肝硬化组织中肝细胞PCNA的表达水平不尽一致, 郎振为et al[7]采用采用免疫组化法观察了肝硬化肝组织中PCNA的表达, 结果表明, 肝硬化时肝细胞的增殖能力相当低下; 牛兆山et al[8]的研究结果表明, 肝硬化组织中只有少量PCNA阳性细胞, 呈单个散在分布, 而癌旁增生性结节中PCNA阳性表达与肝硬化比较有显著性差异, 认为是癌前病变, 而肝硬化中的细胞大多处于静止状态, 是一种高度成熟细胞, 与肝细胞癌的发生没有直接关系, Kawakita et al[9-10]的研究结果也相似, 而付晓梅et al[11-12]的研究则表明肝硬化时肝细胞PCNA的阳性表达率高于慢性肝炎组.

联合应用两种增殖细胞核抗原研究肝癌和肝硬化的研究报道较少[13-14], 本组结果表明肝硬化肝细胞的PCNA和Ki-67指数明显低于慢性肝炎组, 二者有显著差异, 表明慢性肝炎时肝细胞增殖较肝硬化活跃. 在病毒性肝炎后期成熟的肝细胞广泛地被病毒感染, 而且被病毒感染的肝细胞常常失去增殖能力, 但仍在持续发生的肝细胞死亡要求肝组织持续地代偿性再生, 此时再生细胞的主要来源可能是干细胞-卵圆型细胞的增殖, Sun et al[15]报道HCV+和HBV+的肝硬化中存在卵圆型细胞.

肝硬化的肝细胞增生能力与肝纤维化程度之间关系尚不清楚, 贾克东et al[16]对11例肝硬化组织进行纤维化程度SSS评分, 并与PCNA的结果进行相关性分析, 结果表明, 肝硬化的肝细胞增生与肝组织内纤维化程度之间无明显相关性. 本组检测了46例肝硬化胶原纤维面密度, 结果发现, PCNA和Ki-67LI与肝硬化胶原纤维面密度之间也无相关性, 与上述结果相似.

成军et al[17]报道慢性丙型肝炎中82.39%合并不同程度的肝脏脂肪变性, 本组两种类型肝硬化的形态学观察表明, 乙型肝炎肝硬化以水样变性为主, 而大多数丙型肝炎肝硬化肝细胞中出现了以大泡为主的脂肪变性. 本组丙型肝炎肝硬化PCNA与Ki-67 LI高于乙型肝炎肝硬化, PCNA与Ki-67阳性细胞多位于脂肪变性的肝细胞周围, 表明丙型肝炎肝硬化肝细胞增殖可能与脂肪变性有关. 研究表明, 肝组织中脂肪变的存在除了影响抗病毒治疗效果以外, 加速了肝脏病理损伤及纤维化的进程[18], 因此丙型肝炎病毒感染更易转为慢性过程, 肝硬化的发生率(8%-46%)高于慢性乙肝(10%-20%)[19], 脂肪变还能促进肝细胞癌的发生[20]. 尽管肝硬化组织中肝细胞PCNA的表达水平不一致, 但PCNA是肝细胞癌发生的最强独立危险因素, 因此PCNA与Ki-67阳性率高的乙型和丙型肝炎肝硬化患者, 应视为肝细胞癌的高危人群, 需进行密切随访观察.

评论
背景资料

PCNA和Ki67是用于显示细胞增殖状态的比较成熟的标记物, 目前多用于肿瘤的研究中. 研究表明, 肝癌和癌旁肝硬化组织中PCNA表达高于单纯肝硬化组织, 认为PCNA是肝细胞癌发生的最强独立危险因素, 但在单纯肝硬化组织中PCNA的表达水平不一致, 因此深入研究肝硬化组织中肝细胞增殖活性, 对进一步阐明肝细胞癌的发生有重要意义.

创新盘点

利用PCNA和Ki67抗原研究乙型和丙型肝炎肝硬化的研究尚少, 本研究结果表明, 单纯肝硬化组织中肝细胞增殖指数比慢性肝炎低, 但丙型肝炎肝硬化的肝细胞增殖指数比乙型肝炎肝硬化高, 肝硬化胶原纤维的面密度与PCNA和Ki-6LI之间无相关性.

编辑:张焕兰 电编:李琪

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