miR-15a-5p靶向PD-L1对食管癌进展、预后与肿瘤免疫反应的影响

图1 miR-15a-5p和PD-L1在食管癌组织中的表达情况. A: 食管癌组织和癌旁非癌变组织中miR-15a-5p表达水平; B: 食管癌组织和癌旁非癌变组织中PD-L1 mRNA表达水平; C: miR-15a-5p下调PD-L1 mRNA的表达. ^aP<0.05, ^bP<0.05 vs 癌旁非癌组织; ^cP<0.05 vs miR-15a-5p低表达组. PD-L1: 细胞程序性死亡蛋白配体1.

图2 食管癌患者基于miR-15a-5p和PD-L1表达情况的Kaplan-Meier生存分析. A: miR-15a-5p低、高表达组食管癌患者的无病生存期对比; B: miR-15a-5p低、高表达组食管癌患者的总生存期对比; C: miR-15a-5p低表达/PD-L1高表达组与miR-15a-5p高表达/PD-L1低表达组食管癌患者的无病生存期对比; D: miR-15a-5p低表达/PD-L1高表达组与miR-15a-5p高表达/PD-L1低表达组食管癌患者的总生存期对比. PD-L1: 细胞程序性死亡蛋白配体1.

图3 miR-15a-5p降低总的和膜表面的PD-L1的蛋白表达. A: 基于TargetScan软件预测miR-15a-5p与PD-L1结合位点; B: 双荧光素酶报告基因法验证miR-15a-5p与PD-L1的靶向关系, n = 3, ^aP<0.05 vs miR-NC组; C和D: 转染miR-15a-5p mimics和miR-NC的KYSE-150和ECA109细胞中PD-L1总蛋白表达的Western blot检测(C)及其相对表达量的统计分析(D), n = 3, ^aP<0.05, ^bP<0.05 vs miR-NC组; E: 转染miR-15a-5p mimics和miR-NC的KYSE-150和ECA109细胞中PD-L1膜表面表达的激光共聚焦显微镜检测(比例尺=5 μm; 绿色: PD-L1, 红色: 鬼笔环肽); F和G: 转染miR-15a-5p mimics和miR-NC的KYSE-150和ECA109细胞中PD-L1阳性细胞的流式细胞术检测(F)及其PD-L1阳性细胞比例的统计分析(G), n = 3, ^aP<0.05, ^bP<0.05 vs miR-NC组. PD-L1: 细胞程序性死亡蛋白配体1.

图4 食管癌细胞中过表达miR-15a-5p促进在体外共培养体系中CD8+ T细胞的活化. A和B: 显示KYSE-150/CD8+ T细胞共培养实验中IFN-γ阳性CD8+ T细胞的百分比的代表性流式细胞术图(A)以及统计分析结果(B), n = 3, ^aP<0.05 vs miR-NC转染的食管癌细胞/CD8+ T细胞共培养系统; C和D: ELISA法分析KYSE-150/CD8+ T细胞共培养实验收集的上清中的IFN-γ(C)和IL-2(D)的分泌水平, n = 3, ^aP<0.05, ^bP<0.05 vs miR-NC转染的食管癌细胞/CD8+ T细胞共培养系统; E和F: 显示ECA109/CD8+ T细胞共培养实验中IFN-γ阳性CD8+ T细胞的百分比的代表性流式细胞术图(E)以及统计分析结果(F), n = 3, ^aP<0.05 vs miR-NC转染的食管癌细胞/CD8+ T细胞共培养系统; G和H: ELISA法分析ECA109/CD8+ T细胞共培养实验收集的上清中的IFN-γ(G)和IL-2(H)的分泌水平, n = 3, ^aP<0.05, ^bP<0.05 vs miR-NC转染的食管癌细胞/CD8+ T细胞共培养系统. PD-L1: 细胞程序性死亡蛋白配体1; IFN-γ: 干扰素-γ; IL-2: 白细胞介素-2.